Addtech

Nopeat sepsis-patogeenien identifikaatiomääritykset suoraan positiivisesta veriviljelypullosta

AdvanDX:n ainutlaatuiset reagenssikitit perustuvat PNA FISH -teknologian (peptide nucleic acid fluorescence in situ hybridization) hyödyntämiseen positiivisista veriviljelynäytteistä tehtävissä mikrobitunnistuksissa. CE-IVD-hyväksytyt määritykset ovat robusteja, yksinkertaisia ja nopeita, minkä vuoksi patogeeni-identifikaatiot voidaan toteuttaa perinteisiä menetelmiä (mm. selektiiviset eristysmenetelmät) nopeammin (90 min vs. 1-2 vrk). Kliinisten tutkimuksien perusteella antibioottihoito ja lääkevalinta voidaan kohdentaa tämän vuoksi aikaisemmin. Tämän on todettu johtavan mm.:

• pienempään potilaskuolleisuuteen
• säästöihin antibiootti- ja vuodepaikkakustannuksissa
• turhien antibioottikuurien ja niistä aiheutuvien sivuvaikutuksien vähenemiseen

Ei PCR-monistusta – edullinen ja yksinkertainen vaihtoehto

Veriviljelyssä positiiviseksi osoittautunut näyte sisältää suuren määrän ribosomaalisia RNA-kohdemolekyylejä (rRNA), joten erillistä monistusta ei tarvita. Tämän vuoksi PNA FISH -testit eivät ole herkkiä kontaminaatioille kuten useimmat PCR-perusteiset testit. Kuitenkin tutkimuksissa niiden on todettu olevan kliinisesti erittäin herkkiä ja spesifisiä. Yksinkertainen fluoresenssimikroskopointiin perustuva tekniikka ei vaadi laboratorioilta suuria investointeja tiloihin eikä laitteisiin.

PNA FISH – miten se toimii?

Teknologiassa hyödynnetään koettimia, joissa nukleiinihapporakenteista tuttu negatiivisesti varautunut sokeri-fosfaattiranka on korvattu varaukseltaan neutraalilla amidirakenteella. Tämän vuoksi koettimien soluläpäisevyys on hyvä ja kohdemolekyylirepulsio on voitu minimoida, mikä mahdollistaa lyhyessä ajassa (90 min) toteutettavat testit. Testien spesifisyyden takaavat koetinsekvenssit, jotka hybridisoituvat konservoituneisiin, mutta lajispesifisiin rRNA-kohteisiin. Useimmissa PNA FISH -testeissä eri koettimet on konjugoitu eri fluoresoivilla merkkiaineilla (fluoreseiini ja rodamiini-johdannaiset), minkä vuoksi laji-identifikaatio on helposti toteutettavissa fluoresenssimikroskoopilla.

Testit

Yksi PNA FISH -kitti sisältää reagenssit 50 testin suorittamiseen. Kiteissä, joissa tulostulkinta perustuu kahdella eri fluoroforilla konjugoitujen PNA-koettimien havainnointiin, suositellaan kahdella kaistasuotimella varustettua filtteriyksikköä. Tämän avulla eri koettimet voidaan havainnoida samanaikaisesti, mikä nopeuttaa tulosten tarkastelua sekä paljastaa näytteiden mahdolliset sekakasvut. Yeast Traffic Light ja GNR Traffic Light –kiteissä filtteriyksikkö on vaatimus.

Testit (tähdellä merkityt vaativat kaksikaistaisen filtteriyksikön):

• Staphylococcus aureus
• Candida albicans
• Enterococcus faecalis / muut enterokokit (ml. E. faecium)*
• S. aureus / CNS (koagulaasi-negatiiviset stafylokokit)*
• C. albicans / C. glabrata*
• E. coli / P. aeruginosa*
• E. coli ja/tai K. pneumoniae / P. aeruginosa*
• Yeast Traffic Light: C. albicans + C. parapsilosis / C. tropicalis / C. glabrata + C. krusei*
• GBS (Ryhmän B –streptokokkitesti)
• GNR Traffic Light: E. coli / K. pneumonia / P. aeruginosa*

PNA FISH ASR (Analyte Specific Reagent)

ASR-tuotteet ovat tällä hetkellä vain tutkimuskäyttöön tarkoitettuja testejä, jotka toimivat samalla periaatteella kuin muut PNA FISH -tuotteet. ASR-testit perustuvat vain yhden fluoroforin (fluoreseiini) havainnointiin.

Testit:

• Acinetobacter PNA
• C. dubliniensis PNA
• C. parapsilosis PNA
• K. pneumoniae PNA
• BacUni PNA – universaali bakteeritunnistus

Kontrollit

Kullekin testityypille on olemassa omat kontrollit, joilla varmistetaan reagenssien sekä testiolosuhteiden toimivuus. Jokaisella testikerralla on suositeltavaa analysoida myös yksi kontrollinäyte. Kontrollit ovat valmiiksi preparoituja mikroskooppilaseja, jotka sisältävät sekä positiivisen että negatiivisen näytteen. Kontrollit on pakattu 10 kappaleen eriin.

Laitteet ja oheistarvikkeet

PNA FISH -testeihin ei vaadita spesialisoitua laitteistoa. Toteutukseen tarvitaan lämpötilakontrolloitu mikroskooppilaseille soveltuva inkubaattori, vesihaude sekä fluoresenssimikroskooppi. Sopivat laitteet ja oheistarvikkeet (pl. mikroskooppi) ovat tilattavissa myös ns. Starter System –pakettina, joka sisältää seuraavat tuotteet:

• Hybridisaatio-työasema
• Vesihaude
• Kaksoiskaistasuotimella varustettu filtteriyksikkö
• 2x 100 kpl mikroskooppilasit
• 4x 100 kpl peitinlasit
• 3x pesuastia

Laitteet ja oheistarvikkeet ovat hankittavissa myös erikseen.

Tuote:

• PNA FISH -mikroskooppilasit (100 kpl)
• PNA FISH -peitinlasit (100 kpl)
• PNA FISH –kaksikaistainen filtteriyksikkö
• PNA FISH -pesuastia (kymmenelle näytteelle)
• PNA FISH -hybridisaatioasema
• PNA FISH -vesihaude
• Gram-positiivisten bakteerien ja hiivojen kiinnitysliuos, 3 ml
• 60x Pesupuskuri, 50 ml
• Peitinlasiliuos, 3 ml
• Gram-negatiivisten bakteerien kiinnitysliuos, 3 ml

Valmistajan tuotesivut:

www.advandx.com/products