Kun tutkitaan eri yhdisteiden eläville soluille aiheuttamia toksisia vaikutuksia, voi biologisesti oikean mittaushetken löytäminen olla haastavaa. Mittauksen tekeminen juuri oikealla hetkellä on kuitenkin oleellista, koska solujen ei-optimaalinen kasvuvaihe voi johtaa virheellisiin tuloksiin.
Koejärjestelyt
Tecanin menetelmäkuvauksessa ”Walk-Away Monitoring of Cytotoxicity, Viability and Apoptosis” esitellään koe, jossa sytotoksisuutta ja viabiliteettia elävissä soluissa seurattiin automatisoidusti Spark-kuoppalevylukijalla. Kokeessa hyödynnettiin laitteen kykyä injektoida näytteisiin automaattisesti 3/7-kaspaasireagenssia tietyn sytotoksisuustason ylittyessä.
Kokeessa arvioitiin myös kuuden kinaasi-inhibiittorin vaikutusta K562-solujen elinkykyyn yhtäjaksoisesti 72 tunnin aikana. Koejärjestelyssä hyödynnettiin kuoppalevylukijan ympäristökontrolliominaisuuksia ja automaattista kannennostajaa.
Tulokset
Kokeessa havaittiin, että pitkä, automatisoitu kineettinen analyysi mahdollistaa sytotoksisuuden oikean mittaushetken löytämisen – helpottaen yhdisteiden toimintamekanismien tutkimista. Alustavien tulosten mukaan muutokset solukalvossa korreloivat havaitun apoptoositason kanssa. Lisäksi havaittiin, että sytotoksisuusmittausta voidaan käyttää määrittämään oikea hetki 3/7-kaspaasireagenssin lisäämiseen tutkimuksissa. Kaspaasi 3/7 -aktiivisuuden kynnysarvo puolestaan korreloi tunnetusti apoptoosia aiheuttavien yhdisteiden kanssa.
Alkuperäisen englanninkielisen menetelmäkuvauksen voi lukea täältä:
Tecan application note: Walk-Away Monitoring of Cytotoxicity, Viability and Apoptosis
